ترانسفکت کردن سلول های استرومایی مغز استخوان با وکتور حامل ژن فاکتور نوروتروفیک مشتق از رده ی سلولی گلیال(gdnf) و ارزیابی بیان آن در محیط in vitro

ترانسفکت کردن سلول های استرومایی مغز استخوان با وکتور حامل ژن فاکتور نوروتروفیک مشتق از رده ی سلولی گلیال(gdnf) و ارزیابی بیان آن در محیط in vitro مقدمه : فاکتور نوروتروفیک مشتق از رده ی سلولی گلیال (gdnf) از مهم ترین پروتئین ها در رشد و ترمیم سیستم عصبی است. هر گونه نقص در تولید و ترشح این پروتئین موجب اختلالات مختلفی در بازسازی سلول ها در بیماری های مخرب سیتم عصبی می شود.از گزینه های درمانی ممکن، نوروتروفیک درمانی با استفاده از ژن درمانی است. علاقه زیادی در ترمیم سیستم عصبی آسیب دیده با استفاده از پیوند سلول های سلول های بنیادی بالغین به مغز آسیب دیده وجود دارد. ترانسفکشن سلول های استرومایی مغز استخوان (bmscs) با وکتوربیانی حامل gdnf و ارزیابی بیان آن، یکی از اولین اهداف این مطالعه می باشد. مواد و روش ها : با استفاده از وکتور plvpt-gdnf- rttr - krab 2sm2 به عنوان الگو و دو پرایمر دارای جایگاه های آنزیمی hindiii وxhoi ،pro-human gdnf توسط pcr تکثیر شد. محصولpcr خالص سازی شد و سپس در وکتور psectag2/hygrob ساب کلون شد تا وکتور نوترکیب psectag2/hygrob-pro-gdnf حاصل شود. bmscsاز رت جدا شده و کشت داده شدند. از نظر بیان cd 106،cd45، fibronectin و cd44 به عنوان مارکرهای سلول های بنیادی مزانشیمی مورد بررسی قرار گرفتند. سلول های bmsc با pro-gdnf psectag2/hygrob-human ترانسفکت شده و با افزودنhygromycin b درغلظت ?g/ml200 به محیط کشت سلولی پایدار شدند.این سلول ها برای ترشح gdnf با تکنیک های وسترن بلاتینگ و real time rt-pcrمورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج : نشان داده شد که سلول های ترانسفکت شده ی پایدار سطح بالایی از gdnf human را ترشح می کنند. بحث : سلول های ترانسفکت شده ی پایدارتوسط این وکتور به اندازه کافی پروتئین gdnf human را ترشح می کنند. این سلول های پایدار را می توان در کاربردهای بالینی ودر درمان اختلالات بازسازی سلول های عصبی استفاده کرد.